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影響陽離子脂質(zhì)材料轉(zhuǎn)染效率的常見因素

更新時間:2022-06-07   點擊次數(shù):1112次
  陽離子脂質(zhì)材料在經(jīng)轉(zhuǎn)染和表達過程中,有諸多因素均會影響表達效率,如細胞所處的周期、脂質(zhì)體與質(zhì)粒的比例、質(zhì)粒DNA的大小及構(gòu)型、脂質(zhì)體/DNA復合物的正負電荷比例和大小等。
  
  影響因素:
  
  1、細胞所處的周期
  
  細胞轉(zhuǎn)染是一個多步驟、復雜的過程,包括細胞攝取、胞內(nèi)轉(zhuǎn)運和核孔轉(zhuǎn)運。目前普遍認為抑制DNA釋放的因素以及DNA進入細胞核的干擾因素,均對陽性脂質(zhì)體介導基因轉(zhuǎn)染產(chǎn)生重要影響。細胞在有絲分裂時,外源性DNA更容易被細胞核攝取。
  
  由此認為,DNA進入細胞核的一個主要機制是依賴于細胞分裂時的有絲分裂被動進入胞核。此外,脂質(zhì)體的轉(zhuǎn)染效率還跟轉(zhuǎn)染時間、轉(zhuǎn)染細胞的類型、轉(zhuǎn)染細胞的生長狀態(tài)及融合程度等因素有關(guān)。
  
  2、質(zhì)粒DNA的大小及構(gòu)型
  
  有相關(guān)研究把陽離子脂質(zhì)材料作為基因載體,并將3種構(gòu)型(超螺旋、開環(huán)和線型)的質(zhì)粒DNA分別轉(zhuǎn)染Vero細胞,結(jié)果發(fā)現(xiàn)超螺旋質(zhì)粒DNA的轉(zhuǎn)染效率高。
  
  此外,也有實驗表明小于100bp的DNA片段可以在細胞質(zhì)中自由移動。然而隨著DNA片段的增大,其在細胞質(zhì)中的遷移能力也隨之降低。這是由于核孔對于進入細胞核的DNA有大小限制的作用。
  
  3、脂質(zhì)體/DNA復合物的正負電荷比例和大小
  
  脂質(zhì)體/DNA復合物中兩者的正負電荷比例是影響基因轉(zhuǎn)染效率的重要因素。其中的一個重要原因是,兩者所帶電荷比例可直接影響復合物的粒徑,而當復合物的直徑尺寸在0.4-1.4um范圍內(nèi)時,具有較高的轉(zhuǎn)染效率。
  
  以上是影響陽離子脂質(zhì)材料轉(zhuǎn)染效率的幾個常見的因素,在這些影響因素中,對無血清細胞培養(yǎng)基的開發(fā)和利用無疑是提高細胞轉(zhuǎn)染效率的一條重要途徑。
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